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GPCR靶點(diǎn)細(xì)胞

Class A（Rhodopsin） Class B1（Secretin） Class C（Glutamate） Orphan and other 7TM Parental Cell Combination

免疫治療

Fc Effector T Cell Activation Co-Stimulatory Co-Inhibitory Other Immune Checkpoint Combination Cytokine&Growth Factor TAA TLR STING Other

TAA（Mouse Model）

5T4 ADAM9 B7H3 B7H4 BCMA CD123 CD138 CD166 CD19 CD20 CD22 CD228 EpCAM CD24 CD30 CD33 CD38 CD44 CD46 CD47 CD70 CD73 CD74 CD79 CDHs CEACAMs CLDNs CLEC12A DDR1 DLLs DLK1 EpCAM ERBBs FAP FRα GPC3 GPRC5D GPA33 GUCY2C IL2R KK-LC-1 LILRBs LRRC15 LY6G6D NTSR1 MET MSLN MUCs Nectin4 OVA PDL1 PSMA PTK7 RORs SLC34A2 SLC39A6 SORT SSTR2 STEAP1 TF TFRC TROP2 TM4SF1

激酶靶點(diǎn)

AKT AXL BCR-ABL1 BTK BRAF c-Kit CLIP1-LTK CSF1R CSF3R EGFR EML4-ALK ERBB4 ETV6-ARG ETV6-KDR FGFRs FLT3 HER2 JAK2 KRAS MET NTRKs PDGFRA PIMs RET ROS1 Control

示蹤細(xì)胞

腸肺肝淋巴卵巢腦膀胱皮膚前列腺乳腺舌骨腎胃血液咽胰腺子宮

耐藥細(xì)胞

阿霉素多西他賽/紫杉醇氟維司群吉非替尼卡博替尼康士得克卓替尼賽沃替尼順鉑他莫昔芬長(zhǎng)春新堿 DS-8201a 長(zhǎng)期雌激素缺乏其他耐藥細(xì)胞

信號(hào)調(diào)控

信號(hào)調(diào)控細(xì)胞質(zhì)粒

其他細(xì)胞

BCL2 DMPK Ion Channel Nuclear Receptor SARS COV2 Spike Transporter Other cell models

試劑耗材

熒光素酶檢測(cè)試劑盒 TR-FRET試劑 cAMP 檢測(cè)試劑盒耗材

示蹤細(xì)胞

前言

動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)是藥物研發(fā)和生物醫(yī)學(xué)研究不可或缺的手段，在新藥試驗(yàn)、疾病診斷、藥物與醫(yī)療器械安全性研究等領(lǐng)域被廣泛使用，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，可取得真實(shí)可靠的研究數(shù)據(jù)。

活體成像原理

活體成像技術(shù)方法主要分為生物發(fā)光和熒光兩種：生物發(fā)光技術(shù)主要是用熒光素酶(Luciferase)標(biāo)記細(xì)胞，而熒光技術(shù)是用熒光蛋白(如GFP,RFP等)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)：
生物發(fā)光活體成像是指在小的哺乳動(dòng)物體內(nèi)利用熒光素酶基因表達(dá)所產(chǎn)生的熒光素酶蛋白與其小分子底物熒光素在氧、Mg2+離子存在的條件下消耗ATP發(fā)生氧化反應(yīng)，將部分化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢姽饽茚尫?，在體外利用敏感的CCD設(shè)備形成圖像。該方法靈敏度高，特異性強(qiáng)，無(wú)自發(fā)光，背景低，不需要光照激發(fā)，它也有不足之處：波長(zhǎng)依賴性的組織穿透能力，血紅蛋白是吸收光子的主要物質(zhì);每次成像前需要給動(dòng)物麻醉和注射熒光素酶(Luciferase)底物，會(huì)增加人力和試劑成本，底物在體內(nèi)的分布與藥代動(dòng)力學(xué)會(huì)影響發(fā)光信號(hào)。常用的熒光素酶底物：

Name
D-Luciferin Firefly,free acid	D-熒光素，游離酸
D-Luciferin Sodium salt	D-熒光素鈉鹽
D-Luciferin Potassium salt	D-熒光素鉀鹽
L-Luciferin,potassium salt	L-熒光素鉀鹽
Fluorescamine	熒光胺
Coelenterazine	腔腸素

熒光活體成像技術(shù)是通過激發(fā)光將細(xì)胞標(biāo)記的熒光基團(tuán)激發(fā)到達(dá)高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生發(fā)射光。考慮到不同熒光物質(zhì)的發(fā)射光譜和激發(fā)光譜不同，需要成像設(shè)備具備相應(yīng)激發(fā)光源和發(fā)射濾片。該方法對(duì)設(shè)備和試劑要求較低，熒光蛋白可選擇標(biāo)記多種顏色，熒光蛋白穩(wěn)定性強(qiáng)，缺點(diǎn)是靈敏度較低，需要外源光照激發(fā)，非特異性熒光產(chǎn)生的背景噪音使其信噪比和靈敏度遠(yuǎn)低于生物發(fā)光，激發(fā)光對(duì)動(dòng)物有一定影響。

總的來(lái)說(shuō)，現(xiàn)有的活體成像技術(shù)方法各有優(yōu)勢(shì)，在腫瘤相關(guān)的應(yīng)用領(lǐng)域，生物發(fā)光（Luciferase）活體成像技術(shù)的使用更為廣泛，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

示蹤細(xì)胞的構(gòu)建與使用

活體成像技術(shù)的應(yīng)用過程中，示蹤細(xì)胞選擇和標(biāo)記非常關(guān)鍵，示蹤細(xì)胞構(gòu)建過程如下：

1. 選擇符合實(shí)驗(yàn)需求和成瘤性指標(biāo)的母細(xì)胞，需要采用來(lái)源正確，成瘤性良好，傳代次數(shù)較低，狀態(tài)保持良好的細(xì)胞株作為母細(xì)胞；

2. 選擇適合的標(biāo)記蛋白，常用的標(biāo)記蛋白有Firefly Luciferase，GFP，EGFP, RFP, YFP等；

3. 選擇標(biāo)記蛋白表達(dá)載體和基因?qū)敕绞剑ǔＳ寐《痉绞剑?，篩選穩(wěn)定細(xì)胞株；

4. 示蹤細(xì)胞體外發(fā)光測(cè)試，測(cè)定發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度和細(xì)胞傳代信號(hào)穩(wěn)定性，確保示蹤細(xì)胞在體外和體內(nèi)都能穩(wěn)定高水平表達(dá)標(biāo)記蛋白，以科佰生物A549-Luc細(xì)胞為例：

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要通過尾靜脈注射、皮下移植、原位移植等方法在動(dòng)物體內(nèi)接種已標(biāo)記的示蹤細(xì)胞。

6. 活體成像：動(dòng)物經(jīng)麻醉（氣麻/針麻）后放入成像暗箱平臺(tái)，開啟照明燈（明場(chǎng)）拍攝背景圖。關(guān)閉照明燈，在沒有外界光源的條件下（暗場(chǎng)）拍攝由小鼠體內(nèi)發(fā)出的特異性光子。明場(chǎng)與暗場(chǎng)的背景圖疊加后可以直觀的顯示動(dòng)物體內(nèi)特異光子的部位和強(qiáng)度，完成成像操作。值得注意的是熒光成像需要選擇合適的激發(fā)光和發(fā)射光濾光片，生物發(fā)光則需要成像前注射luciferase底物。

7. 數(shù)據(jù)處理：動(dòng)物活體成像圖像處理軟件除了提供含有光子強(qiáng)度標(biāo)尺的成像圖片外，還能計(jì)算分析發(fā)光面積、總光子數(shù)、光子強(qiáng)度的相關(guān)參數(shù)供實(shí)驗(yàn)者參考。

應(yīng)用介紹

1.長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)檢測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)，并可建立相應(yīng)的動(dòng)物模型進(jìn)行抗腫瘤藥物的篩選。動(dòng)物體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)示例：

2.腫瘤轉(zhuǎn)移：由于活體成像技術(shù)直觀、靈敏度高的特點(diǎn)，成為研究腫瘤轉(zhuǎn)移的重要手段。動(dòng)物體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移示例：

3.基因治療研究：利用標(biāo)識(shí)蛋白基因分別標(biāo)記病毒或細(xì)胞, 觀察標(biāo)記病毒在體內(nèi)對(duì)細(xì)胞的靶向識(shí)別和特異性殺傷。實(shí)驗(yàn)示例：

4.CAR-T治療研究：利用標(biāo)識(shí)蛋白分別標(biāo)記CAR-T細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞, 觀察CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)分布和擴(kuò)增，評(píng)估對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和特異性殺傷效果。實(shí)驗(yàn)示例：

科佰示蹤細(xì)胞株特點(diǎn)

1. 優(yōu)質(zhì)母細(xì)胞，具備STR驗(yàn)證數(shù)據(jù)

2. 高信噪比

3.體外高穩(wěn)定性

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